Bei der Aussaat von Samen aus grünen Kapseln nützt man die Tatsache aus, dass die Samen in der Kapsel bereits nach etwa 2/3 der Reifezeit voll entwickelt und frei von Kontaminationen sind (steril). Das letzte Drittel der Reifezeit benötigt die Samenkapsel zum Trocknen und Freisetzen der Samen.
notwendige Geräte und Utensilien:
notwendiges Verbrauchsmaterial:
Bezugsquellen und genaue Infos sind der Liste "Utensilien für in vitro Aussaat" zu entnehmen.
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Vorteile von grünen Kapseln:
Nachteile von grünen Kapseln:
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Vorbereiten des Arbeitsplatzes:
Bei der hier beschrieben Methode wird der aufsteigende Wasserdampf über dem Kochtopf als steriler Arbeitsbereich genutzt. Sehr wichtig ist, dass in dem Raum jede vermeidbare Zugluft unterbunden wird (Fenster schließen). Wie man die einzelnen Komponenten aufstellt, kann man nur durch Probieren herausfinden. Bei uns (Rechtshänder) hat sich folgende Aufstellordnung als am besten erwiesen. Die Kerze steht so nah wie möglich rechts neben dem Kochtopf auf einem Korkuntersetzter (für Kochtöpfe). Rechts neben der Kerze befindet sich das Fläschchen 70%iger Ethanol in dem alle Instrument (Pinzette, Impföse) stehen und dort auf ihren Einsatz warten. Unmittelbar links neben dem Topf befindet sich ein in Ethanol getränktes Küchentuch auf dem die Alukappen abgestellt werden. Weiter links befinden sich die Kulturgläser mit den Nährmedien (auf dem Bild unten nicht zu sehen).
Weitere Arbeitsgänge:
Den Kochtopf etwa 3 cm mit Wasser füllen und zum Kochen bringen. Die Temperatur der Herdplatte ist so zu wählen, dass das Wasser immer kocht. Sobald das Wasser kocht nimmt man den Deckel von Topf, reinigt den Gitterrost mit einem Stück in 70%igen Ethanol getränkter Küchenrolle und legt den Rost auf den Topf.
Desinfektion von grünen Samenkapseln:
Zu Beginn sollte man die Kapsel gründlich auf eventuell vorhandene Öffnungen untersuchen da durch diese Löcher Pilzsporen in die Kapsel eindringen können. Weist die Kapsel keine Öffnungen auf, dann kann man eingetrocknete Blütenblätter und andere tote Teile vorsichtig entfernen.
gereinigte Kapsel
Als nächstes nimmt man das verschraubbare Glas und spült es gründlich mit Ethanol aus. Der Alkohol wird abgegossen und das Glas zu ca. 3/4 mit DanKlorix gefüllt. Jetzt gibt man die Kapsel in das Glas wobei man darauf achten muss, dass die Kapsel komplett untergetaucht ist.
Aufbringen der Samen:
Alle Schritte müssen in Dampfstrom durchgeführt werden. Offene Eprovetten und deren Verschlüsse (ausgenommen Alufolienkappen) dürfen den Dampfstrom nicht verlassen.
Nachdem die Samenkapsel 15 Minuten im DanKlorix sterilisiert wurde nimmt man einen Wattepad, tränkt diesen mit 70%igen Ethanol und legt ihn im Dampfstrom am Gitterrost ab. Jetzt nimmt man das Glas in dem die Samenkapsel sterilisiert wurde, öffnet es im Dampfstrom und legt den Deckel am Küchentisch ab. Während die eine Hand das Glas im Dampfstrom hält nimmt man mit der anderen Hand die Pinzette, flammt diese ab und entnimmt damit die Samenkapsel. Die Kapsel wird auf dem ethanolgetränkten Wattepad im Dampfstrom abgelegt, das Glas kann man am Küchentisch abstellen. Jetzt schwenkt man die Pinzette kurz im kochenden Wasser und stellt sie zurück in den Ethanol.
Als nächstes flammt man die Pinzette und das Skalpell ab und öffnet damit die Samenkapsel. Danach wird die Pinzette und das Skalpell kurz im kochenden Wasser geschwenkt und zurück in den Ethanol gestellt.
Jetzt nimmt man eine Eprovette mit Nährmedium und entfernt im Dampfstrom die Alufolienkappe. Die Kappe legt man neben dem Kochtopf auf dem ethanolgetränkten Küchentuch ab.
Als nächstes flammt man die Pinzette ab und entfernt damit den Wattepfropfen den man am Gitterrost ablegt.
Ist das erledigt, flammt man die Impföse ab und entnimmt damit ein paar Samen aus der Kapsel. Die Samen werden auf direkten Weg in die Eprovette gebracht und dort auf dem Nährboden verteilt. Danach schwenkt man die Impföse kurz im kochenden Wasser und stellt sie zurück im Ethanol.
Jetzt steckt man den Wattepfropfen in die Eprovette. Die Pinzette wird danach kurz im kochenden Wasser geschwenkt und zurück in den Ethanol gestellt.
Als nächstes nimmt man die Eprovette und flammt das Ende des Wattepfropfens kurz ab (die Eprovette dabei einmal um die eigene Achse drehen).
Ist das erledigt, nimmt man die Alufolienkappe und schiebt diese über den Wattepfropfen. Um die Folienkappe vor Verrutschen zu sicher versehen wir jede Eprovette mit einem Gummiring der die Alufolie an die Eprovettenwand drückt.
Einige Tips:
Aufstellen der Kulturgläser:
Die mit Samen versehenen Kulturgefässe sollten möglichst hell und warm (ca. 20 - 25 Grad) stehen. Es ist darauf zu achten, dass die Gläser keiner direkte Sonne ausgesetzt werden, weil dadurch die Temperatur im Inneren zu sehr ansteigt und möglicherweise die Aussaat vernichtet. Weiters sollte der Ort keinen starke Temperaturschwankungen (z.B. beim Lüften am Fensterbrett im Winter) ausgesetzt sein weil es bei wechselnder Temperatur zu einer Druckänderung in unseren Gläsern kommt und unter Umständen Luft in das Glas gesaugt wird. Wir stellen unsere Kulturgläser zwischen den Orchideen am Fensterbrett auf. Es ist zu empfehlen die Gläser an verschieden Orten mit unterschiedlichen Lichtbedingungen aufzustellen. Dadurch bekommt man rasch ein Gefühl dafür welcher Samen unter welchen Bedingungen am besten keimen.
